La technologie CRISPR-Cas : Technologie de modification ciblée du génome

Les interactions entre les procaryotes et les virus qui les infectent ont évolué, donnant lieu à une grande diversité de systèmes CRISPR-Cas. Les systèmes CRISPR-Cas sont généralement divisés en deux catégories (classe 1 et classe 2). Jusqu'ici, la plupart des chercheurs ont utilisé le système CRISPR-Cas de type 2, et dans cette catégorie, le type II le plus étudié est le système CRISPR-Cas9.

Le système CRISPR/Cas9 implique deux composants essentiels : l'ARNg CRISPR spécifique à la cible et la nucléase Cas9. Dans les systèmes eucaryotes, CRISPR/Cas9 est utilisé pour l'édition génomique par le biais d'un ciblage spécifique de l'ADN par l'ARNg, une combinaison de l'ARN CRISPR (ARNc) et de l'ARNc trans-activant (ARNtc), par le biais d'un appariement de bases sur la séquence guide de ~20 nt [1]. Cas9 reconnaît une très courte séquence conservée (de quelques nucléotides) adjacente à la séquence guide, appelée "motif adjacent au protospacer" (PAM). Une fois dirigée vers le site cible de l'ADN, la Cas9 génère une cassure double brin (CDB) qui peut être réparée soit par la jonction terminale non homologue (NHEJ) qui induit une mutation indel, soit par la réparation dirigée homologue (HDR) de haute fidélité, ce qui entraîne des effets d'élimination de gènes ou le remplacement de gènes en fonction du modèle.