Protéine biotinylée

Série PrecisionAvi

Les produits de cette série sont fabriqués exclusivement à l'aide de la technologie Avitag™. En résumé, un peptide unique de 15 acides aminés, l'étiquette Avi, est introduit dans la protéine recombinante pendant la construction du vecteur d'expression. Le résidu de lysine unique présent dans l'étiquette Avi est biotinylé enzymatiquement par la biotine ligase BirA d'E. Coli.

Cette technique de marquage enzymatique en un seul point apporte de nombreux avantages pour les tests de liaison couramment utilisés.

• La biotinylation ne se produit que sur le résidu lysine de l'étiquette Avi.

• AUCUNE interférence avec les activités de liaison naturelles de la protéine cible.

• L'orientation de la protéine est uniforme lorsqu'elle est immobilisée sur une surface revêtue d'avidine.

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Série UltraLys

Les produits de cette série sont fabriqués à l'aide de notre approche d'étiquetage chimique développée en interne. Les amines primaires dans les chaînes latérales des résidus de lysine et l'extrémité N-terminale de la protéine sont conjuguées avec des biotines, ce qui entraîne généralement une fixation de plusieurs biotines sur une seule molécule de protéine.

• Sensibilité de détection plus élevée

• Approche d'étiquetage chimique développée en interne

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Le plus proche de la conformation et de la modification naturelles

La production de nos protéines recombinantes, y compris les protéines biotinylées, est réalisée à l'aide de notre plate-forme d'expression propriétaire HEKMax®. En tant qu'hôtes d'expression, les cellules HEK293 humaines présentent divers avantages par rapport aux autres types de cellules, comme résumé dans le tableau ci-dessous.

Bioactivité et sensibilité de détection élevées

La bioactivité des protéines biotinylées est déterminée à la fois par la structure de la protéine elle-même et par la manière dont la biotinylation est effectuée. Pour chaque protéine, nous testons plusieurs options d'étiquettes et de méthodes de biotinylation, et évaluons les produits par une variété d'essais de liaison. Seuls ceux qui présentent les meilleures performances sont sélectionnés pour la production. La figure 1 est un exemple de nos expériences d'évaluation interne :

Fig. 1 Binding activity of different forms of biotinylated PD1 evaluated in a functional ELISA against rhPD-L1 (Cat. No. PD1-H5258).

Our biotinylated proteins demonstrate high bioactivity and superb detection sensitivity in different application. In functional ELISA, the biotinylated human TACI has high binding activity with BAFF as showed in Fig. 2. Interestingly, oriented immobilization of biotinylated CD155 offers much higher sensitivity than random immobilization of unconjugated CD155 as showed in Fig. 3. Fig.4 and Fig. 5 show that the biotinylated PD1 can be well applied to AlphaLISA to detect the binding activity with its ligand PD-L1 and PD-L2. The Fig. 6 and Fig. 7 show that the biotinylated protein can be easily used for determining the affinity between protein and therapeutic antibody in SPR assay. Also, the biotinylated proteins are often used in cell based assay, such as cytotoxicity assay and evaluation of CAR expression (Fig. 8 & Fig. 9).

Fig.2 Immobilized Human BAFF, Fc Tag, active trimer (Cat. No. BAF-H5261) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human TACI, Fc,Avitag (Cat. No. TAI-H82F6) with a linear range of 0.002-0.05 μg/mL.

Fig. 3 Comparison of oriented immobilization (biotinylated CD155 on precoated streptavidin plate, Cat. No. CD5-H82E3) and random immobilization (unconjugated CD155 direct coating on 96-well plate, Cat. No. CD5-H5223）binding to TIGIT（ Cat. No. TIT-H5254）. Oriented immobilization of biotinylated CD155 offers much higher sensitivity than random immobilization of unconjugated CD155.

Fig 4. Biotinylated Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）at 1 μg/mL (5 μL/well) can bind Human PDL1 (Cat. No. PD1-H5229) with a linear range of 0.02-0.625 μg/mL.

Fig 5. Biotinylated Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）at 1 μg/mL (5 μL/well) can bind Human  PDL2 (Cat. No. PD2-H5220) with a linear range of 0.02-0.625 μg/mL.

Fig. 6 Immobilized biotinylated human VEGF165 (Cat. No. VE5-H82Q0) on CM5 Chip via streptavidin, can bind Avastin with an affinity constant of 0.417nM as determined in SPR assay (Biacore T200).

Fig.7 Loaded Biotinylated Human PD-1, Avitag,His Tag (recommended for biopanning) (Cat. No. PD1-H82E4) on SA Biosensor, can bind Human PD-L1, His Tag (HPLC verified) (Cat. No. PD1-H5229) with an affinity constant of 2.4 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e).

Fig. 8 Recombinant human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) induces cytotoxicity effect on the WEH1-13VAR cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The EC50 for this effect is 0.014-0.029 ng/ml. The result shows that the biotinylated human TNF-alpha is consistent with naked TNF-alpha in cytotoxicity assay.

                 

Faible variation d'un lot à l'autre

We routinely apply rigorous quality control measures to ensure consistent performance of our products. Newly produced products are subjected to side-by-side comparison with our internal standard in a variety of assays. Only those within an acceptable margin of difference are allowed to be released. As demonstrated in Fig. 9, three different batches of biotinylated hTNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) are tested and compared using a standard ELISA analysis against Adalim*mab, the result shows that the batch variation among the tested samples is negligible. The batch-to-batch conformance is also good as displayed in cell based assay (Fig. 10).

Fig. 10 In the above ELISA analysis, three different lots of biotinylated hTNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) were used detect immobilized Adalim*mab (0.5 ug/ml). The result showed that the batch variation among the tested samples is negligible.

Fig. 11 Recombinant biotinylated human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) induces cytotoxicity effect on the WEH1-13VAR cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The EC50 for this effect is 0.029-0.052 ng/ml.