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Produits marqués par fluorescence Star Staining
Outils de nouvelle génération pour la détection des CAR

Star Staining-Fluorescent-labeled Products
Introduction
Les produits marqués par fluorescence Star Staining sont développés par une technologie de marquage spécifique au site de nouvelle génération de qualité "Star Standard" par ACROBiosystems. Ces produits sont spécialement conçus pour détecter et surveiller les cellules CAR-T dans les essais cliniques.
La protéine marquée par fluorescence est un outil puissant pour la détection de l'expression des CAR dans la recherche et les échantillons cliniques par cytométrie en flux. Ces protéines sont des colorants fluorescents pré-marqués qui peuvent détecter l'expression des CAR par une coloration en une étape avec un minimum de fond. Cependant, le développement de protéines marquées par fluorescence de haute qualité présente un défi majeur et il n'y a que peu de produits disponibles à l’achat jusqu'à présent
La technique de conjugaison est un goulot d'étranglement majeur pour le développement de protéines marquées par fluorescence de haute qualité. Actuellement, la technique de marquage la plus largement utilisée sur le marché est l'approche traditionnelle de marquage chimique. C'est une méthode très simple pour marquer une protéine de manière covalente avec un colorant fluorescent de manière non spécifique. Cependant, une modification aléatoire peut conduire à une hétérogénéité et peut affecter la bioactivité de la protéine en bloquant le site actif de la protéine. Des études indiquent que la technologie de marquage spécifique au site de nouvelle génération peut attacher des colorants fluorescents à une protéine spécifique de manière spécifique au site. Elle garantit l'homogénéité des produits marqués par fluorescence et évite d'affecter l'activité des protéines. Cette propriété en fait une arme utile pour le développement de produits protéiques marqués par fluorescence de haute qualité avec une spécificité et une sensibilité élevées.
Caractéristiques des produits
Marquage chimique traditionnel
Traditional Chemical Labeling
Marquage aléatoire non sélectif et affectant la structure naturelle
Peut couvrir les sites actifs pour réduire la bioactivité
Facile à agréger en raison du changement de l'hydrophilie des protéines
Grande variation de la cohérence de lot à lot
Marquage spécifique au site de nouvelle génération
New-generation Site-specific Labeling
Le marquage se produit au niveau du Tag spécifique et loin des sites actifs des protéines
Maintient la conformation et la modification naturelles
Technologie bio-orthogonale efficace
Hautes cohérence et uniformité de lot à lot.
Caractéristiques du Star Staining

ACROBiosystems s'efforce de développer des réactifs de détection de haut niveau pour soutenir le développement de la thérapie cellulaire CAR-T. Après des années de recherche et d'expérience de nos techniciens, nous avons mis en place avec succès la plate-forme de marquage spécifique au site "Star Staining" et développé une série de protéines exclusives marquées par fluorescence de qualité "Star Standard". Les produits « Star Staining » peuvent être des outils puissants pour détecter et surveiller les cellules CAR-T dans les essais cliniques.

Utilisation d'une technologie de marquage spécifique au site de nouvelle génération pour maintenir la bioactivité naturelle

Hautes spécificité et sensibilité vérifiées par cytométrie en flux

Pas de liaison non spécifique aux PBMC non transduites

Hautes cohérence et uniformité de lot à lot

Produits chauds
  • FITC

  • PE

  • APC

  • Alexa Fluor 647

  • Alexa Fluor 555

  • Alexa Fluor 488

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Affichage des données

Haute pureté

Haute pureté de plus de 90 % du BCMA humain marqué FITC Star staining
BCMA SDS-PAGE

FITC-Labeled Human BCMA, His Tag (Cat. No. BCA-HF2H3) on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 90%.

BCMA SEC-MALS

The purity of FITC-Labeled Human BCMA, His Tag (Cat. No. BCA-HF2H3) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 24-34 kDa verified by SEC-MALS.

Haute bioactivité

Activité de liaison supérieure à celle des autres concurrents
BCMA binding activity verified by FACS
CD19 binding activity verified by FACS

Binding activity of FITC-Labeled Human BCMA and CD19 protein from two different vendors were evaluated by the FACS analysis. The result showed that ACRO's Star Staining FITC-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HF2H3) and CD19 (Cat. No. CD9-HF2H3) protein have a much higher binding activity than that of the other competitor.

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Alexa Fluor 647-Labeled Human Mesothelin (296-580)

The activity of Alexa Fluor 647-Labeled Human Mesothelin (296-580), His Tag (Cat. No. MSN-HA2H5) was higher than other Competitor.


Alexa Fluor 488-Labeled Human Mesothelin / MSLN (296-580) Protein

The activity of Alexa Fluor 488-Labeled Human Mesothelin (296-580), His Tag (Cat. No. MSN-HA2H9) was higher than other Competitor.

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La protéine CD19-Star Staining PE ou CD19-APC peut détecter l'expression de CAR CD19 avec une sensibilité élevée par cytométrie en flux.
APC-CD19 FACS binding activity verified by FACS

Anti-CD19 CAR-293 cells were stained with PE-Labeled Human CD19 (20-291) Protein (Cat. No. CD9-HP2H5), His Tag star staining and negative control protein respectively, PE signal was used to evaluate the binding activity.

PE-CD19 binding activity verified by FACS

Anti-CD19 CAR-293 cells were stained with APC-Labeled Human CD19 (20-291) Protein (Cat. No. CD9-HA2H9), His Tag star staining and negative control protein respectively, APC signal was used to evaluate the binding activity.

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Pas de liaison non spécifique aux PBMC non transduites

Les produits Star Staining n'ont pas de liaison non spécifique aux PBMC non transduits avec une activité de liaison plus élevée que celle des autres concurrents
BCMA-PBMC  verified by FACS

Non-specific binding to non-transduced PBMCs between PE-Labeled Human BCMA Protein of Acro and competitor. 5e5 of non-transduced PBMCs were stained with PE -Labeled Human BCMA Protein and anti-CD3 antibody, washed and then analyzed with FACS. FITC signal was used to evaluate the expression of CD3+ T cells in non-transduced PBMCs, and PE signal was used to evaluate the non-specific binding activity to non-transduced PBMCs.

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BCMA PBMC comparison Data

Non-specific binding to non-transduced PBMCs between FITC-Labeled Human BCMA Protein of Acro and competitor. 5e5 of non-transduced PBMCs were stained with FITC-Labeled Human BCMA Protein and anti-CD3 antibody, washed and then analyzed with FACS. PE signal was used to evaluate the expression of CD3+ T cells in non-transduced PBMCs, and FITC signal was used to evaluate the non-specific binding activity to non-transduced PBMCs.

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Maintient la bioactivité naturelle

Capacité de liaison élevée avant et après conjugaison, vérifiée par FACS et RPS
BCMA bioactivity verified by FACS

Binding activity of the Human BCMA before and after FITC labeling was evaluated in the above FACS analysis. The result shows that FITC-Labeled BCMA (Cat. No. BCA-HF2H3) and unconjugated Human BCMA have almost the same level of binding activity.

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BCMA binding affinity  verified by SPR
FITC-BCMA binding affinity  verified by SPR

Binding affinity of the Human BCMA before and after FITC labeling was evaluated in the above SPR analysis (Biacore T200). The result shows that FITC-Labeled (Cat. No. BCA-HF2H3) and unconjugated Human BCMA, His Tag have almost the same level of affinity.

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Haute cohérence de lot à lot

L'activité de liaison de différents lots de protéine BCMA humain marquée FITC/Alexa Fluor-555/PE a été vérifiée par FACS
FITC-BCMA batch-to-batch consistency verified by FACS
AF555-BCMA  batch-to-batch consistency verified by FACS
PE-BCMA batch-to-batch consistency verified by FACS

Binding activity of different lots of FITC-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HF2H3) , AF555-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HA2H6) and PE-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HP2H7) against anti-BCMA CAR-293 cells was evaluated by flow cytometry. The result shows very high batch-to-batch consistency.

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Haute stabilité

PE-BCMA stability verified by FACS
FITC-BCMA stability verified by FACS

PE-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HP2H7) and FITC-Labeled Human BCMA (Cat. No. BCA-HF2H3)  25℃ for 48 hours and freeze-throw cycles are stable without performance reduction.

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RÉFÉRENCES

[1] Abbasov ME, Kavanagh ME, Ichu TA, et al. A proteome-wide atlas of lysine-reactive chemistry [published online ahead of print, 2021 Sep 9]. Nat Chem. 2021;10.1038/s41557-021-00765-4.

[2] Xu L, Kuan SL, Weil T. Contemporary Approaches for Site-Selective Dual Functionalization of Proteins. Angew Chem Int Ed Engl. 2021;60(25):13757-13777.

[3] Devabhaktuni A, Lin S, Zhang L, et al. TagGraph reveals vast protein modification landscapes from large tandem mass spectrometry datasets. Nat Biotechnol. 2019;37(4):469-479.

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