Protéine CD20 pleine longueur exprimée HEK293 avec Nanodisc / DDM / VLP

La 61e réunion annuelle de la société américaine d'hématologie (ASH) en 2019 a présenté des anticorps bispécifiques qui ciblent CD20 à la surface des lymphocytes B et CD3 à la surface des lymphocytes T, tels que CD20-TCB, avec des résultats préliminaires d'études cliniques montrant une innocuité acceptable et une efficacité prometteuse pour cette paire d'anticorps spécifiques.

Le CD20 est une cible privilégiée pour le traitement du lymphome, de la leucémie et de certaines maladies auto-immunes. Cependant, en raison de son faible titre d'expression et de sa bioactivité instable, il est très difficile de trouver une protéine CD20 active sur le marché pour le développement de médicaments anticorps et l'expression CAR de CD20.

Pour résoudre ces problèmes, ACROBiosystems a développé les protéines CD20 multi-transmembranaires hautement actives, exprimées par les cellules HEK293. Les protéines CD20 actives de pleine longueur comportent à la fois de grandes et de petites boucles ECD et se lient aux anticorps anti-CD20 avec une affinité de liaison élevée dans les tests ELISA et SPR. Nous avons différents types de protéines CD20, notamment des protéines non conjuguées, des protéines biotinylées avec DDM, Nanodisc et VLP, qui conviennent à l'immunisation, ELISA, SPR, BLI et FACS.

Le DDM peut désintégrer la membrane lipidique pour libérer la protéine membranaire et fournir un environnement hydrophobe, maintenir et protéger la structure transmembranaire hydrophobe des protéines membranaires. Mais il n'est pas recommandé pour les expériences cellulaires car il peut détruire la structure de la membrane cellulaire.

Nanodisc est une structure non covalente de bicouche phospholipidique et de protéine d'échafaudage membranaire. Les protéines membranaires peuvent être intégrées dans des nanodiscs pour maintenir leur activité biologique, la protéine CD20 avec nanodisc a été recommandée pour les expériences cellulaires.

La plate-forme technologique VLP (particules pseudo-virales) basée sur le système d'expression HEK293 est spécialement mise en place par ACROBiosystems pour exprimer des protéines transmembranaires à la surface de la cellule hôte. La protéine d'enveloppe/capside virale transforme ensuite ces surfaces cellulaires en particules de bicouche lipidique soluble avec des protéines hautement concentrées utilisables pour la vaccination et le crible par les anticorps. Le complexe protéine membranaire-VLP s'affiche correctement replié dans sa membrane cellulaire induisant et criblant des anticorps fonctionnels qui reconnaissent la conformation naturelle de la cible.

La protéine CD20 pleine longueur a une conformation complète avec à la fois de petites et de grandes boucles.

La protéine CD20 pleine longueur a une meilleure bioactivité

La bioactivité de la protéine CD20 pleine longueur a été vérifiée par FACS/ELISA/SPR et les protocoles sont proposés.

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Human CD20 / MS4A1 Full Length Protein, His Tag (Nanodisc) (HEK293)(Cat. No. CD0-H52H1) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE anti-His antibody and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 5 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) with a linear range of 0.008-0.125 μg/mL

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag (Cat. No. CD0-H52H1) with a linear range of 1-63 ng/mL

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-3 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-6 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Biotinylated Human CD20, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) captured on Biotin CAP-Series S Sensor Chip can bind RTX with an affinity constant of 1.73 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore T200).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) captured on CM5 chip via Anti-human IgG Fc antibodies surface can bind RTX with an affinity constant of 6.21 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore 8K).

Protocol